产品目录

核糖体提取试剂盒可用于各种动物细胞和实体软、硬组织样本核糖体蛋白的提取。提取的蛋白可用于WB、蛋白电泳、免疫沉淀、ELISA、转录活性分析、Gel shift凝胶阻滞、酶活性测定等下游蛋白研究实验。
本试剂盒提取的蛋白为具有天然蛋白构象的活性蛋白。
本试剂盒中不含有EDTA，与金属螯和层析等下游应用兼容。
本试剂盒提取的蛋白含高浓度盐成分，不可直接用于2D电泳，需除盐后再用于2D电泳。如下游实验需直接用于等电聚焦、双向电泳，请使用其他货号试剂盒。也可将最后样品除盐后再用于2D电泳，用脱盐柱脱盐处理（HR0389）。

组份	50T	100T
试剂A：核糖体提取液A	50mL	100mL
试剂B：核糖体提取液B	25mL	50mL
试剂C：核糖体蛋白提取液C	20mL	40mL

2～8℃保存，有效期1年。


高速离心机，振荡器，Dounce匀浆器，涡旋混匀器，PBS缓冲液(pH7.4)，蛋白定量试剂盒


● 旋帽离心管装的试剂在开盖前请短暂离心，将盖内壁上的液体甩至管底，避免开盖时液体洒落。
● 实验过程中的所有试剂须预冷；所有器具须放-20℃冰箱预冷。整个过程须保持样品处于低温。
● 细胞最好采用新鲜收集的，或者收集后立即置于-80℃保存的样本。
● 最好使用标准Dounce匀浆器匀浆，如果没有标准Dounce匀浆器，用普通玻璃匀浆器匀浆也可，但是核糖体回收率可能会下降。


细胞核糖体提取：

• 取1～2×107个细胞，在4℃，500～1000×g条件离心5分钟，小心吸取培养基，尽可能吸干，收集细胞；
  
• 用冷PBS洗涤两次，每次洗涤后尽可能吸干上清。
  注：
  ● 在500×g～1000×g条件下离心5分钟。
  
• 加入500μL～1mL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 用Dounce匀浆器匀浆20～30下。
  注：
  ● 标准Dounce匀浆器用紧杵5～8次，松杵匀浆15～20次。
  ● 匀浆杵一个上下来回为一次。
  ● 普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。
  
• 将匀浆液在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，100000×g～120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。可以提高核糖体回收率。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 在沉淀中加入400μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃，100000×g～120000×g力条件下离心60分钟。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。可以提高核糖体回收率。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 弃上清，沉淀用50～100μL核糖体提取液C重悬。
  
• 即得到核糖体蛋白样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

组织核糖体提取：

• 取50～100mg新鲜动物组织样本，用PBS洗涤干净。
  
• 用剪刀尽可能剪碎，用冷PBS洗涤两次。
  注：
  ● 在500×g～1000×g条件下离心5分钟。
  
• 加入500μL～1mL冷的试剂A，置冰上10分钟。
  
• 用Dounce匀浆器充分匀浆20～30下，至无明显固体团块。然后在4℃，1000×g力条件下离心5分钟。
  注：
  ● 标准Dounce匀浆器用紧杵5～8次，松杵匀浆15～20次。
  ● 匀浆杵一个上下来回为一次。
  ● 普通玻璃匀浆器匀浆一般也不超过30次，匀浆次数并非越多越好。
  
• 将上清吸入另一预冷的干净离心管。
  
• 在4℃，20000×g力条件下离心10分钟，弃沉淀，收集上清。
  
• 将上清在4℃，100000×g～120000×g力条件下离心60分钟。弃上清，收集沉淀。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。可以提高核糖体回收率。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 在沉淀中加入400μL冷的试剂B，混匀。
  
• 在4℃，100000×g～120000×g力条件下离心60分钟。
  注：
  ● 如果条件允许，可将离心时间延长到2～24小时。可以提高核糖体回收率。
  ● 液体量较少没有合适转头时，可以将小离心管套入大离心管进行离心；或者用PBS补充液体量后用合适的离心管离心。
  
• 弃上清，沉淀用50～100μL核糖体提取液C重悬。
  
• 即得到核糖体样品，置冰箱-80℃冻存备用或直接用于下游实验。
  注：
  ● 建议用BCA法进行蛋白定量。相关产品：HR0329。
  ● 蛋白样品-80℃存放一年没有问题。注意不要被蛋白酶水解掉，不要被细菌污染。

相关搜索：核糖体蛋白提取试剂盒